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北京華科盛精細化工產(chǎn)品貿易有限公司
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郵箱:13683659548@163.com
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使用顯色液時(shí)需要注意哪些要點(diǎn)?
更新時(shí)間:2022-03-25 點(diǎn)擊次數:1094次
顯色液SDS-PAGE電泳后,蛋白質(zhì)按照分子量大小分離,轉移到固相載體( 例如硝酸纖維素薄膜)后,固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì),以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原,與對應的抗體起免疫反應,再與酶標記的二抗體起反應,經(jīng)過(guò)底物顯色以檢測電泳分離的特異性的蛋白。
顯色液的使用要點(diǎn):
1.請根據一抗來(lái)源選擇試劑盒.
2 westem blotting DAB顯色法操作簡(jiǎn)單,但其敏感性與ECL發(fā)光發(fā)有一定的差距,一般只適用于豐度較高的蛋白.
3.可以根據顯色結果來(lái)優(yōu)化實(shí)驗反應時(shí)間。如背景過(guò)深,可延長(cháng)膜封閉時(shí)間,加長(cháng)較終漂洗次數與時(shí)間。如果條帶過(guò)弱,同遠長(cháng)抗體孵育時(shí)間。
4.如果*沒(méi)有條帶,請檢查前期蛋白處理及實(shí)驗過(guò)程,如果確認無(wú)誤, 反復兩次依舊無(wú)結果,請換用ECL發(fā)光法顯色。
5. TBST (0.01M)配制方法:稱(chēng)取NaCl8.5g,Tris 1.21g,用800ml的雙蒸水溶解,用鹽酸調PH到76,再
加入0SmlTween-20,用雙蒸水加至1000ml,混勻即可。(也可按照自己的配制習慣來(lái)配制)
顯色液的保存:
-20C避光密閉保存,- 年有效。若經(jīng)常使用,可將封閉試劑,抗體稀釋液和20倍DAB顯色液B存放于2-8C以方便使用。