緩沖液是一種能在加入少量酸或堿和水時大大減低pH變動的溶液.pH緩沖系統對維持生物的正常pH值和正常生理環境起到重要作用.多數細胞僅能在很窄的pH范圍內進行活動,而且需要有緩沖體系來抵抗在代謝過程中出現的pH變化.在生物體中有三種主要的pH緩沖體系,它們是蛋白質緩沖系統、重碳酸鹽緩沖系統以及磷酸鹽緩沖系統.每種緩沖體系所占的分量在各類細胞和器官中是不同的。
 

　　緩沖液根據用途，一種是單純的HEPES+NaOH，另一種是HEPES+鹽。各種配制方法總結如下：
 

　　一、500ml 1 M HEPES, pH = 7.0 Stock solution的配制
 

　　119.15 g HEPES 溶解在400ml蒸餾水中，加0.5~1M 的NaOH水溶液調節至少所需pH(HEPES的有效pH 范圍是6.8~8.2)，然后用蒸餾水定容至500ml，于4攝氏度保存。
 

　　二、加少量鹽的HEPES Buffer配方(500ml)
 

　　HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na2HPO4.7H2O 0.198g、用0.5M NaOH 水溶液調節pH值，較后定容。
 

　　三、2×HEPES緩沖鹽溶液的配制
 

　　將1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖(glucan or dextran)和1g HEPES溶解在90ml的蒸餾水，用0.5M NaOH調節至所需pH值，再用蒸餾水定容至100ml即可。
 

　　HEPES使用方法有兩種：
 

　　(1)HEPES可按所需的濃度直接加入到配制的培養液中，再過濾除菌。每1000ml培養液中加入2.38克HEPES，待溶后用lN NaOH 調pH至7.2，濾過除菌后使用。此時HEPES的使用濃度為10 mmol/L。
 

　　(2)亦可配成 100 x 貯存液(l mol/L)，使用前取 99ml培養液加入 lml貯存液，較終應用濃度仍為10mmol/L。l mol/L(100 x)HEPES貯存液配制方法：取23.8g HEPES溶于90ml雙蒸水中，用lN NaOH調pH至7.5一8.0，然后用水定容至100ml，過濾除菌，分裝小瓶(2ml/瓶)，4℃或-20℃保存。
 

　　需要注意的是，HEPES緩沖液的使用終濃度為10-50mmol/L，對細胞無毒性作用。一般情況下，濃度為20mmol/L的HEPES即可達到緩沖能力。